SafeRed 核酸染料（10,000× 水溶液）（紫外）

SafeRed 核酸染料（10,000× 水溶液）

SafeRed核酸染料特点

1. 安全无毒：独特油性大分子使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏实验表明，该染料的诱变性远远小于EB。

2. 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。

3. 稳定性高： 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。

4. 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

5. 操作简单：与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

6. 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

7. 完美兼容：与EB有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。

产品包装：10,000x   SafeRed Nucleic Acid Dye   500uL                   

储存条件： 2-8℃避光干燥可保存12个月。

SafeRed操作步骤

一．胶染法（推荐方法，用法类似EB）

制胶时加入SafeRed 核酸染料(染料灵敏，每100mL 琼脂糖溶液中加入3～5μL SafeRed 原装液即可)。 按照常规方法电泳。

2. 按照常规方法进行电泳

*注：此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做200～500块 50mL的胶。染料加入胶中可直接使用微波炉加热，制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。

优化电泳条件参考事项：

要得到漂亮胶图与多种因素有关，需要在EB的基础上优化电泳条件，请尝试：marker浓度和样品浓度稀释一倍；降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；降低电压延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。SafeRed染料由于染料分子偏大，会对marker的大片段迁移有一定影响，偶尔会造成拖带，微笑条带等情况。减少DNA上样量。污染和微笑条带往往是过量的DNA样本造成的。推荐的泳道和已知浓度的样品的上样量为50-200ng/泳道。对于未知浓度的样品，尝试1/2或1/3的常用上样量；减少SafeRed在凝胶中的总量，比如用0.5X的浓度来代替1X的浓度。 配制百分比浓度小的琼脂糖凝胶。高分子量的DNA在低百分比的琼脂糖凝胶分离效果比较好。

更换电泳缓冲液。新配置的电泳液效果好！ TBE缓冲液比TAE缓冲液的效果更好。

染料过于灵敏，建议marker浓度稀释一倍，特别是含大片段多的marker！目前的marker是基于EB开发的，浓度对于SafeRed一般是偏高的。

染料过于灵敏，建议未知浓度的样品的稀释一倍后上样，特别是含大片段多的样品。

与EB相比，SafeRed电泳电压要低一些(一般是5V/cm但是不绝对)，跑胶的时间长一些。

SafeRed染料和样品混合后，点样到琼脂糖凝胶中，有时效果非常好，有时效果不好。

由于SafeRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将SafeRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。SafeRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

如果总是看到条带弥散或分离不理想，为了避免染料可能对DNA迁移的干扰，建议使用电泳后染胶。使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关！

*此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

二．泡染法

（1）按照常规方法进行电泳。

（2）用H₂O将SafeRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中，制成3×染色液。（例如将15μL SafeRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H₂O中）。

（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。

*注意事项：用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右；3× SafeRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。

特别提醒：

如果您使用的是紫外成像仪，请选择SafeRed；如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，请选择 DuGreen。

少数情况下质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，建议尝试两种染色方法决定哪种方法更合适。