黄曲霉毒素 B1（AflatoxinsB1） ELISA 检测试剂盒

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黄曲霉毒素B1检测试剂盒

（酶联免疫法） 说明书

【产品名称】

黄曲霉毒素B1检测试剂盒（酶联免疫法）

【包装规格】

96 人份/盒。

【预期用途】

本产品用于定量测定粮食、谷物和饲料中黄曲霉毒素B1的含量。

黄曲霉毒素（AFT）是黄曲霉和寄生曲霉等产生的二次代谢产物，属于双呋喃环类毒素。其衍生物有约20种，分别命名为B₁、B₂、G₁、G₂、M₁、M₂、GM、P₁、Q₁、毒醇等。其中以B₁的毒性最大，是自然界中最危险的致癌物质。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，黄曲霉毒素在1类致癌物清单中。黄曲霉毒素的检测方法已有多种，包括酶联免疫、胶体金等方法。酶联免疫分析法具有灵敏度高、操作简单、检测速度快、特异性强等特点，且适用于批量检测。

【检验原理】

本试剂是采用竞争法检测黄曲霉毒素B1抗原，在微孔板的孔内预先包被了黄曲霉毒素B1偶联抗原，将样本和工作液（内含黄曲霉毒素B1抗体）加入微孔中，若样本中含有黄曲霉毒素B1，则与包被物共同竞争黄曲霉毒素B1抗体，洗去游离成分，加入酶结合物，与黄曲霉毒素B1偶联抗原-黄曲霉毒素B1抗体复合物结合，洗去游离成分，加入显色底物反应5min，再加入终止液，用酶标仪读取吸光值并计算结果，待测物含量与吸光值成反比。

【储存条件及有效期】

2～8℃避光保存，有效期 12 个月。

板条开封后 2～8℃存放效期为 3 个月，其他液体组分同成品试剂盒效期；试剂可短期常温运输，避免冰冻或长时间高温。

生产日期、失效日期：见标签。

【适用仪器】

HTF-Ⅰ型酶联免疫分析仪。

【样本处理】

组织、饲料、谷物（大米、小米、玉米）、花生粕

称取3g粉碎好的样品，加入7.5mL 50%甲醇-水（甲醇：去离子水=1：1），充分搅拌混匀（3分钟），4000rpm离心10min，取适量上清液按体积比1：1与样品稀释液（由浓缩稀释液稀释20倍制得）混匀（检测限为10ppb），花生粕样品最低检测限为40ppb。

2、 食用油

取1.0±0.05g食用油样本于50ml离心管中；加入5mL样本提取液，再加入4mL正己烷，充分振荡3min，20℃
4000rpm离心10min；去掉上清，取中间层液体100µL，加入700µL样品稀释液，充分振荡混匀。

3、 花生样本

取1.0±0.05g研碎的花生样本于50ml离心管中；加入5mL样本提取液，再加入4mL正己

烷，充分振荡3min，20℃ 4000rpm离心10min；去掉上清，取中间层液体100µL，加入400µL样品稀释液，充分振荡混匀。

【主要组成成分】

注：不同批号试剂盒各组分不可以互换。

【检验方法】

1、将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡（30 分钟以上）；

2、将浓缩洗涤液按 1：40 的比例稀释，摇匀备用，作为应用洗涤液；

3、根据阴性对照品、阳性对照品及待测标本确定所需孔数（阴性对照品应至少设 2 孔，阳性

对照品至少设 1 孔）；

4、每孔先加入阴阳对照/待测标本各 50µL ，再加入抗体工作液50µL ，振荡器振荡 30

秒钟（此步非常重要），盖上封板膜，置 37℃水浴 30 分钟；

5、洗板，用应用洗涤液洗板 5 次，洗涤时每孔注满洗涤液，停留 10 秒后吸尽拍干；

6、取 100µL 酶结合物加入各孔，用振荡器振荡 30 秒（此步非常重要），盖上封板膜，置 37℃ 水浴 30 分钟；

7、取出，洗板五次，操作同上；

8、加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色5min。

9、测定：加入终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议5min内读数），测定每孔OD值。

【结果判定】

1、粗略判定：

用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(pg/ml)。假设样本1的吸光度值为0.4，样本2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.374；
0.02ppb为1.296；0.06ppb为1.259；0.18ppb为0.987；0.54ppb为0.681；1.62ppb为0.386。则样本1的浓度范围是0.54ppb～1.62ppb；样本2的浓度范围是0.06ppb～0.18ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素B1实际浓度。

2、定量分析

以标准品吸光值为纵坐标，以黄曲霉毒素B1标准品浓度（pg/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素B1实际浓度。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。

【产品性能指标】

1、用国家参考品检定时符合国家标准。

阴性符合率：用 30 份阴性参考品检测，阴性参考品符合率≥29/30。

阳性符合率：用 30 份阳性参考品检测，阳性参考品符合率≥29/30。

灵敏度：4 份灵敏度参考品，L1、L2 检出阳性，L3 检出阳性或阴性，L4 检出阴性。

批内精密性：1 份精密性参考品，10 孔检测变异系数（CV）≤15%。

批间精密性：3 批试剂盒检测同一样本各重复 10 次，批间变异系数（CV）应不高于 20%。

2、钩状效应：本试剂盒检测高浓度的样品时不会出现钩状（HOOK） 效应现象。

【注意事项】

1、本试剂盒仅用于测定样品中黄曲霉毒素B1的含量，一个试剂盒应作为整体应用，不要将不同批号的试剂混合用，不得使用超过有效期的试剂盒。

2、试剂瓶用前应摇匀。

3、请将拆封后未用完的包被板条放入袋内密封，2～8℃保存。

4、请严格按照说明书操作，严格控制反应时间和温度，各种反应液可用移液器加注，并经常对其进行校准。

5、常温下浓缩洗涤液有结晶，稀释时应注意稀释完全。

6、洗涤时各孔必须加满，防止孔中有游离酶不能洗净而导致本底加深。

7、封板膜不得重复使用；温浴时，板条外部与水接触，温浴效果好。

8、试剂盒各组分皆经灭活处理，但仍应视为具有潜在感染性。

【参考文献】

［1］《中华人民共和国药典》（2015 年版）

［2］《体外诊断试剂注册管理办法》，2014 年 10 月 1 日.

［3］《医疗器械说明书和标签管理规定》，2014 年 10 月 1 日.

［4］《体外诊断试剂说明书编写指导原则》，2014 年 10 月 1日

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